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研究測試(三)| 緩沖體系可能對LNP的性質與穩定性有較大影響

更新時間:2023-08-30   點擊次數:2462次

我們接著這個話題,通過一篇美國俄勒岡州立大學藥學院的研究論文,進一步討論緩沖體系對mRNA-LNP的影響,供大家參考。該研究測試了三種常見生物緩沖液——HEPES、Tris和PBS——在單次凍融前后與DLin-MC3-DMA mRNA-LNP制劑的相容性。通過電子顯微鏡、差示掃描量熱法和膜流動性分析發現,不同緩沖液使LNP形態發生了不同的結構變化。采用體外和體內模型測量mRNA轉染效率,發現Tris或HEPES緩沖液中的LNPs具有更好的冷凍保護效果以及與PBS相比更高的轉染效率。

 

試驗結果:

脂質納米顆粒(LNP)通常通過透析或與生理緩沖液(如PBS)交換緩沖液來中和,純化后可直接注射入生物體。此外,緩沖體系可以作為冷凍保護劑,減輕LNP制劑在低溫儲存時的穩定性問題。

 

值得注意的是,FDA批準的C*V*D-19疫苗Spikevax和Comirnaty使用不同的緩沖液,這表明不同的mRNA-LNP制劑可能對緩沖體系有不同的要求。(筆者注:Comirnaty上市后制劑處方中緩沖體系由PBS變更為了Tris,詳細信息請參考:《Moderna:使用TRIS緩沖體系可提高mRNA穩定性》

 

因此,為LNP制劑篩選適宜的緩沖體系是一個ji具價值的研究課題。然而,緩沖體系對LNP的結構形態、包封率和轉染效率方面的作用迄今尚未得到充分研究。

 

分享的研究中,使用常用陽離子脂質DLin-MC3-DMA制備mRNA-LNP,在-20℃低溫冷凍3周,比較了LNP凍存前后的理化性質和生物學活性(體外+體內)。

 

結果表明,通過體外和體內轉染衡量,在HEPES和Tris體系中的LNPs總體上優于PBS。與PBS相比,HEPES和Tris作為冷凍保護劑,可以在更大程度上保存LNPs的結構和mRNA的遞送效率。

 

此外,儲存在HEPES中的LNPs在FT循環后形成了du特的沙漏狀結構,而Tris和PBS在凍融后都產生了高度聚集的結構。因此,HEPES可以為LNPs提供更好的保護,防止pH梯度急劇下降,防止LNP聚集,最終控制相分離過程。另一方面,使用Tris對轉染特別有益,這表明緩沖鹽等輔料在LNP制劑中的作用可能被大大低估了。

 

通過分享該研究,艾偉拓產品團隊希望揭示LNP制劑處方研發過程中,緩沖體系選擇的重要性,希望能夠為廣大核酸遞送企業及相關從業者帶來一定的參考。

 

未來,艾偉拓產品團隊也會持續關注核酸遞送制劑處方相關研究進展,包括不同劑型(如凍干劑型)、不同存儲條件(如2~8℃冷藏存儲)、不同LNP脂質組分及不同載荷等因素對LNP制劑輔料選擇的影響。

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